BUNSEN資訊| ELISA試劑盒的空白孔設置及注意事項

　　ELISA試劑盒的空白孔設置步驟如下：

　　1. 空氣空白\水空白：一般是用于儀器調零的,所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值。

　　2.底物空白：一般是用于防止底物弱顯色所造成的讀數(shù)偏高，同樣所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值(只加底物和終止液)

　　3. 酶空白：一般在2步法實驗中使用，主要是看酶是否和板有非特異性結合的，一般不做這個 。

　　ELISA試劑盒空白孔一般設一個，這是為了減除顯色液的OD值。而陰性和陽性標準品最好是設2個復孔，雖然有點浪費，但為了確保實驗的可靠性，我認為還是很有必要的。ELISA試劑盒空白孔加什么?一般兩個做法，看個人習慣或者說看你們實驗室的習慣：

　　1，什么都不加，然后那個孔按照操作流程來做，這個說法的根據(jù)就是空白，也就是什么都沒有。

　　2，加樣本稀釋液，然后按照操作流程來做。這個做法的根據(jù)就是只要不含陽性物質就算是空白的，加入樣本稀釋液的目的是為了使這個孔除了在沒有陽性物質上其他的都與其他孔一致。

　　ELISA試劑盒注意事項：

　　1、血清標本可按常規(guī)方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。

　　2、 血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。

　　3、一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫入x心或過濾，澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作，也可加入適當防腐劑。

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